肉的宰后嫩化重要归因于肌原人造玻纤构造的损毁，肌原人造玻纤构造是由内源性蛋清电离酶分解肌原人造玻纤和上皮神经组织内部系骨架蛋清会导致的。与几百年来持续是瞩目原点的钙蛋清酶与众不同，胱天蛋清酶（caspases）之前成了感好奇心来看题。胱天蛋清酶在上皮神经组织内部系凋亡的审理环节起着至关很重要的目的，这里面caspase-3在临死前蛋清电离中的目的是一定要多方位面和非常复杂的，往往必玩进步骤探索。S-亚硝基化完成缓解钙移除、电能代谢率、蛋清质分解和上皮神经组织内部系凋亡来缓解吃起来，是指嫩度和持水程度。刚开始探索得知S-亚硝基化可不可以降低依赖性线粒体的caspase-3级联反响，这应该是手臂肌肉上皮神经组织内部系凋亡和羊肉高质量改变的原因分析。caspase-3的探索重要是其与上皮神经组织内部系凋亡的感情，同时，越来越少有探索探析S-亚硝基化缓解caspase-3的制度。

2024年9月由苏州农产品加工大学考研张万刚传授队伍在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱生物工程为该研究提供了亚硝基化呈现组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

繁体中文关键词：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

期刊杂志：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2023年影响到因素：5.7

收录时间段：2024年9月

潜在客户工作单位：南京农业大学

调查相关材料：蛋白

拜谱提供数据技术性：亚硝基化修饰组学

技术工艺路线地图：

一、研究分析但是

01.Caspase-3抗逆性

当今尚不清理NO对caspase-3的抑止功能能否归因于NO介导的S-亚硝基化，不相同氨水浓度等度的GSNO最为外源性NO供应商，以诱导型caspase-3的身体S-亚硝基化。结局取决于，与不会有GSNO的组对比，100、200和400μM GSNO组的caspase-3抗逆性有明显大幅度降低了（图1），与事先报道范文同一。GSNO办理大幅度降低了caspase-3抗逆性的隐藏原因分析仍尚待确立。

图1 不同的溶液浓度的GSNO处理对caspase-3化学活化的印象

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化的程度

探析Caspase-3的亚硝基化水平上，以指出GSNO对Caspase-3的反映性。经GSNO加工处理后，在线探测到caspase-3蛋白酶S-亚硝基化抗拉强度添加（图2）。这种结杲证明，外源性GSNO激发可取得成功诱骗caspase-3的休外S-亚硝基化。可笑震惊的是，在不GSNO产生的對照组中在线探测到某个细小的S-亚硝基化带，这证明caspase-3几率引发内源性的S-亚硝基化。虽然，本探析中caspase-3的S-亚硝基化水平上较高，而caspase-3的吸附性降低了，这与之间的探析不一。不过，caspase-3的炎症因子朋友S-亚硝基化突显位点尚不清理，还必须要进一步推动骤的探寻。

图2 GSNO处置对caspase-3S-亚硝基化质量的影响力

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化装饰组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的回文队列。浅蓝色符号的回文队列表述S-亚硝基化肽，灰色符号的C表述S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱仪

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3挥发结球蛋白

结淀粉酶充当其中一种很重要的的组织肿瘤细胞骨架淀粉酶，在长期保持肌组织肿瘤细胞空间结构特征的空间结构特征完善版性和膨胀性工作方面起比较偏很重要的用途，深入分析S-亚硝基化caspase-3对结淀粉酶吸附塑料的特别敏理想化极具很重要的意议。与Std（未用胱天淀粉酶酶-3和GSNO孵育的默认值肌化学纤维材料淀粉酶）组相较于，0 μM GSNO组（肌原化学纤维材料和caspase-3的孵育，无GSNO）的完善版结淀粉酶程度不错削减，警告caspase-3对结淀粉酶极具潜在性的的淀粉酶核蛋清质质水解程度。在GSNO孵育后，完善版结淀粉酶的程度清晰提高（P < 0.05）。显然，当GSNO氧化还原电位增加时，完善版结淀粉酶的程度延续调涨（P < 0.05）（图5）。这一个遇到证明，SNO表达的caspase-3以程度根据的方法控制结淀粉酶的吸附塑料。

图5.S-亚硝基化caspase-3分解结淀粉酶

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3生物降解肌钙血清-T

肌钙淀粉酶-T (TnT)是原肌球淀粉酶调整承当腹肌膨胀的细细的的必需品肌原合成人造纤维材料淀粉酶。TnT的生物吸附表现是监测到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化的条件下，caspase-3对TnT的生物吸附实际情况如同6下图，与Std组（不添加caspase-3和GSNO的肌原合成人造纤维材料）相较于，caspase-3组中30 kDa TnT片断差别性添加，得出结论caspase-3进行了TnT的生物吸附，显然，caspase-3与GSNO的孵育引起30 kDa TnT急剧下降。在100和200 μM GSNO组期间没监测到强势的差别(P > 0.05)，而当GSNO的有机废气浓度以达到400 μM 时，该片断差别性减掉(P < 0.05)。许多发掘得出结论了SNO绘制的caspase-3对TnT生物吸附的抑设计用角色。结淀粉酶和TnT是caspase-3的敏感性底物，而GSNO除理缩减caspase-3的可溶性机会引起肌原合成人造纤维材料淀粉酶生物吸附程度上缩减。上面按照上面的施工方式施工，NO诱发的S-亚硝基化都可以按照绘制半胱氨酸残基来调整caspase-3的可溶性，而使进几步导致其对结淀粉酶和TnT的淀粉酶水解反应实力，为了导致鸡肉产品。

图6. S-亚硝基化caspase- 3溶解肌钙血清-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、个人心得体会

本分析目的在于研讨S-亚硝基化对caspase-3突显的会影响力下列关于陆陆续续对鸡肉肌原玻纤素身体之外生物降解的会影响力。核血清质S-亚硝基化能能突显caspase-3的半胱氨酸残基，以此会造成caspase-3化学活化减轻，进步骤阻止了其对鸡肉肌原玻纤素核血清质的核血清质淀粉水解专业能力。

三、拜谱工作小结

探讨利用了酶活检测工具，亚硝基化呈现组学解析，WB等检测工具伎俩，看到球血清酶酶S-亚硝基化可能呈现caspase-3的半胱氨酸残基，这引致了caspase-3渗透性的影响，相结一大步可以抑制了其对牛羊肉肌原纤维棉球血清酶酶的球血清酶酶油脂水解力。本探讨为描述球血清酶酶质亚硝基化对色泽的调节管控工作机制供给好几回个新的视觉。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的核胆固醇组学、体现核胆固醇组学、细胞代谢组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸系列表食品，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺酸性反应、total空气氧化完美重现、游离子巯基，欢迎大家咨询！

参考资料文献资料：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663